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慢病毒包装

慢病毒简介:
       慢病毒(Lentivirus) 载体是以HIV-1 (人类免疫缺陷Ⅰ型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。
       对于一些较难转染的细胞, 如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等,使用慢病毒载体,能大大提高目的基因或目的shRNA的转导效率,且目的基因或目的shRNA整合到宿主细胞基因组的几率大大增加,能够比较方便快捷地实现目的基因或目的shRNA的长期、稳定表达。所以,在体外实验及体内实验的研究中,慢病毒己经成为表达外源基因或外源shRNA的常用载体形式之一, 并且正在获得越来越广泛的应用。
慢病毒包装系统组成:
       慢病毒包装系统一般由慢病毒表达载体和慢病毒包装载体组成。
       慢病毒表达载体,即通常所说的穿梭载体,包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。而慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒,需要利用表达载体和包装质粒同时共转染293T细胞,在细胞中进行病毒的包装, 包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中,离心取得上清液后,可以直接用于宿主细胞的感染。
       现在的慢病毒包装系统一般都是三质粒或四质粒包装系统。其中四质粒系统比三质粒系统在生物安全性上更好一些,所以应用较多。

       3个包装质粒图谱:

慢病毒-3个包装质粒图谱.png


       
百恩维服务项目:
       百恩维生物提供慢病毒载体构建,RNAi(shRNA)、miRNA、过表达和干扰慢病毒包装,以及基于慢病毒技术的稳定细胞系构建服务。
    百恩维生物采用第三代 4质粒慢病毒包装系统,生物安全性更高; 
    采用VSV-G包膜,宿主范围更广; 
    产生的慢病毒滴度高,可达108~1010TU/mL; 
    各种慢病毒穿梭载体可供选择:过表达、ShRNA、miRNA、Tet诱导表达载体等; 
    可带有荧光报告基因(GFP、RFP、mCherry、Luciferase等)和药筛标记基因(Puro、Neo、Hygromycin等),有多种启动子(CMV、PGK、CAG、Ubc等)可供选择; 
    3~4周内即可完成载体构建以及病毒包装服务。


慢病毒优点:
       1  宿主范围广  包装病毒时用VSV-G基因代替了原病毒的env基因,宿主范围更广,如神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞。 
       2  感染能力强  慢病毒载体对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力,能感染绝大多数细胞,对一些难于转染的细胞,比如神经元细胞、干细胞或其它原代细胞有较好的感染效率。
       3  具有整合能力 慢病毒载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达,因此可用于构建稳定表达目的蛋白/RNAi的细胞株,也可以用于制备转基因动物。 

 

1970-01-01

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